冰凍切片在-20℃條件下通常可保存1-3個(gè)月，實(shí)際保存時(shí)間受組織類型、固定處理方式、保存容器密封性、溫度波動(dòng)頻率及切片厚度等因素影響。

1、組織類型：

不同組織成分對(duì)低溫耐受性差異顯著。脂肪組織因脂質(zhì)易氧化，保存期不超過1個(gè)月；肌肉組織可維持2個(gè)月左右；而纖維結(jié)締組織穩(wěn)定性較高，部分樣本可達(dá)3個(gè)月。建議根據(jù)組織特性標(biāo)注保存期限。

2、固定處理：

經(jīng)4%多聚甲醛預(yù)固定的切片保存期延長(zhǎng)30%-50%，未固定樣本易出現(xiàn)冰晶損傷。固定時(shí)間控制在24小時(shí)內(nèi)可最大限度保持抗原性，過度固定反而會(huì)導(dǎo)致組織脆化。

3、密封條件：

使用真空密封袋配合干燥劑的切片比普通塑料袋保存延長(zhǎng)1倍時(shí)間。密封不良會(huì)導(dǎo)致反復(fù)凍融，每次凍融可使RNA完整性下降15%-20%，蛋白質(zhì)抗原表位損失10%以上。

4、溫度波動(dòng)：

頻繁開閉冰箱會(huì)使保存期縮短40%。-20℃環(huán)境每日溫度波動(dòng)超過±5℃時(shí)，組織內(nèi)冰晶重結(jié)晶現(xiàn)象加劇，建議配備獨(dú)立低溫保存箱，波動(dòng)范圍控制在±2℃以內(nèi)。

5、切片厚度：

5μm薄切片比10μm厚切片保存時(shí)間長(zhǎng)20%。過厚切片中心部位易形成大冰晶，解凍后易分層脫落。采用防凍包埋劑可改善厚切片保存效果。

長(zhǎng)期保存建議采用-80℃超低溫環(huán)境，可維持樣本活性2年以上。日常使用時(shí)做好分類標(biāo)記，避免反復(fù)凍融。定期檢查冰箱密封條和除霜功能，存放時(shí)遠(yuǎn)離冰箱門位置。重要研究樣本建議分裝多管保存，配合使用專業(yè)生物樣本管理系統(tǒng)記錄存取信息。對(duì)于免疫組化等特殊用途樣本，保存超過1個(gè)月后需重新驗(yàn)證抗原活性。