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慢病毒上清可以在4°c放多久

傳染科編輯 健康小靈通
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關(guān)鍵詞:#病毒

病毒上清在4°C環(huán)境下通??杀4?2小時,實(shí)際保存時間受病毒滴度、保存容器密封性、反復(fù)凍融次數(shù)、添加劑成分及初始污染風(fēng)險等因素影響。

1、病毒滴度:

高滴度慢病毒上清因載體濃度較高,穩(wěn)定性相對更好。實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)顯示,滴度超過1×10^8TU/mL的樣本在4°C降解速率顯著低于低滴度樣本,但超過96小時后活性仍可能下降30%以上。

2、容器密封性:

使用無菌螺口凍存管或帶硅膠墊的EP管能有效隔絕空氣氧化。普通離心管因密封性不足,可能導(dǎo)致培養(yǎng)基蒸發(fā)和pH值變化,使病毒半衰期縮短至48小時內(nèi)。

3、反復(fù)凍融:

凍融會破壞病毒包膜結(jié)構(gòu),經(jīng)3次以上凍融的樣本在4°C存放時,24小時內(nèi)滴度可能衰減50%。建議分裝為單次用量,避免反復(fù)凍融。

4、添加劑影響:

添加5%甘油或1%人血清白蛋白可維持病毒穩(wěn)定性。含EDTA等螯合劑的保存液可能干擾后續(xù)轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn),需根據(jù)下游應(yīng)用選擇添加劑。

5、初始污染:

制備過程中支原體細(xì)菌污染會加速病毒失活。無菌檢測陽性的樣本即使在4°C保存,24小時后滴度衰減可達(dá)80%,需立即處理或丟棄。

為最大限度保持病毒活性,建議將慢病毒上清分裝至無菌凍存管,每管標(biāo)注滴度、制備日期及批次號,添加適宜保護(hù)劑后置于-80°C長期保存。短期使用時優(yōu)先采用預(yù)冷離心機(jī)處理樣本,操作全程保持冰上環(huán)境。轉(zhuǎn)染前需檢測滴度,活性低于初始值60%時應(yīng)重新制備。實(shí)驗(yàn)人員需佩戴防護(hù)裝備,避免氣溶膠暴露,廢棄物料需經(jīng)121°C高壓滅菌處理。

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